Phương pháp đo độ đục: là phương pháp gián tiếp xác định mật độ vi sinh – https://suanha.org

vật. Định lượng tỷ lệ tế bào trải qua đo độ đục bằng máy so màu ở những bước sóng từ 550 – 610 nm .
Phương pháp xác lập tỷ lệ tế bào theo độ đục hoàn toàn có thể được dùng để so sánh mức độ tăng trưởng của hai hay nhiều chủng vi sinh vật trong môi trường tự nhiên lỏng. phương pháp này cho hiệu quả nhanh gọn và thường được ứng dụng trong theo dõi hoặc điều tra và nghiên cứu đặc trưng tăng trưởng của những chủng vi sinh vật trong phòng thí nghiệm hoặc trong sản xuất tuy nhiên không thích hợp dùng trong kiểm nghiệm vi sinh vật .
N

A (CFU/g hay CFU/ml) = Trong đó:
n1Vf1 + …+ niVfi

Bạn đang đọc: Phương pháp đo độ đục: là phương pháp gián tiếp xác định mật độ vi sinh – https://suanha.org

A : số tế bào vi trùng trong 1 g hay 1 ml mẫu
N : tổng số khuẩn lạc đếm được trên những đĩa đã chọn ni : số lượng đĩa cấy tại độ pha loãng thứ i
V : thể tích dịch mẫu ( ml ) cấy vào trong mỗi đĩa fi : độ pha loãng tương ứng

VI.5. Các thử nghiệm sinh hóa:

Người ta hoàn toàn có thể định danh vi sinh vật dựa vào những đặc thù sinh hóa đặc trưng của loài ( hay nhóm ) vi sinh vật đó. Có ba cách tiếp cận để thực thi những thử nghiệm sinh hóa dùng cho mục tiêu định danh là cách truyền thống cuội nguồn, cách sử dụng những bộ KIT và dùng những thiết bị tự động hóa .
Các thử nghiệm sinh hóa quan trọng thường được sử dụng trong kiểm nghiệm vi sinh vật gồm có :

 Thử nghiệm khả năng lên men: nhằm xác định khả năng sử dụng một nguồn

cacbon nhất định bởi vi sinh vật để tăng trưởng. Nguồn cacbon này được chia làm 3 nhóm : đường đơn, đường đa và rượu. Khả năng lên men được nhìn nhận sự làm giảm pH của môi trường tự nhiên dẫn đến sự biến hóa màu của thông tư pH trong môi trường tự nhiên. Ngoài ra, CO2 được tạo thành sẽ được bẫy lại thành bọt khí trong ống chuông Durham làm nổi ống chuông này ( thiên nhiên và môi trường lỏng )
hoặc làm vỡ thạch ( môi trường tự nhiên rắn ). Được dùng để định danh những vi sinh vật đường ruột .

 Thử nghiệm khả năng oxy hóa – lên men: còn được gọi là thử nghiệm Hugh

– Leifson nhằm mục đích xác lập vi sinh vật đang thử nghiệm biến dưỡng hydratcacbon theo phương pháp oxy hóa hay phương pháp lên men. Thử nghiệm này được triển khai bằng cách nuôi cấy chủng thử nghiệm trên môi trường tự nhiên Hugh – Leifson có glucose là nguồn cacbon duy nhất và thông tư pH là bromothymol blue. Các loại sản phẩm có tính axit của quy trình lên men sẽ làm biến hóa màu thông tư .

 Thử nghiệm Bile esculin: thử nghiệm này phân biệt vi sinh vật dựa trên khả

năng thủy phân link glucoside trong esculin thành esculetin và glucost khi có sự hiện hữu của muối mật. Esculetin phản ứng với muối sắt trong thiên nhiên và môi trường tạo thành hợp chất màu đen hay nâu đen .

 Thử nghiệm khả năng biến dưỡng citrate: môi trường thử nghiệm khả năng

biến dưỡng citrate sử dụng citrate làm nguồn cacbon duy nhất và có chứa muối ammonium dùng làm nguồn đạm làm tăng giá trị pH của thiên nhiên và môi trường. Sự ngày càng tăng giá trị pH này được thông tư bằng sự đổi màu của thông tư pH trong môi trường tự nhiên .

 Thử nghiệm catalase:catalase là enzyme chỉ chứa trong tế bào vi sinh vật

hiếu khí và kỵ khí tùy ý. Catalase thủy phân H2O2 thành H2O và O2 ngăn cản sự tích tụ của phân tử có độc tính cao này trong tế bào. Sự giải phóng O2 sẽ được ghi nhận trải qua hiện tượng kỳ lạ sủi bọt khí .

 Thử nghiệm decacboxylase: thường dùng để định danh và phân loại các vi

khuẩn đường ruột họ Enterobacteriaceae. Các vi sinh vật này thường cảm ứng tạo thành những enzyme decacboxylase khi môi trường tự nhiên có tính axit và có chất cảm ứng đặc hiệu ( một loại axit amin nào đó : lizin, ornithin, arginin, … ) trong toàn bộ những trường hợp, CO2 sinh ra làm tăng pH của thiên nhiên và môi trường và được ghi nhận qua sự đổi màu của thông tư pH .

 Thử nghiệm coagulase: một số loài vi khuẩn đặc biệt là nhóm
Staphylococcus, có khả năng tiết ra môi trường enzyme coagulase có tác

dụng làm kết tụ những thành phần của huyết tương. Thử nghiệm này được dùng ở bước sau cuối trong những chỉ tiêu thử nghiệm để định danh những loài trong giống Staphylococcus : Staphylococcus aureus ( + ), Staphylococcus

epidermidis (-).

 Thử nghiệm urease: một số vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp urease để

thủy phân ure. Sự phóng thích NH3 và CO2 làm tăng pH của thiên nhiên và môi trường và hoàn toàn có thể được theo dõi qua sự đổi màu chất thông tư pH. Thử nghiệm urease đặc trưng cho những loại Proteus spp .

 Thử nghiệm gelatinase: một số vi sinh vật có khả năng tổng hợp nhóm

enzyme gelatinase ngoại bào thủy phân gelatin trong môi trường tự nhiên nuôi trường nuôi cấy. Trong thử nghiệm này, phản ứng ( + ) khi thiên nhiên và môi trường đặc tan chảy thành dạng lỏng .

 Thử nghiệm khả năng tăng sinh H2S: trong quá trình phân giải các axit amin

chứa lưu huỳnh khí H2S được giải phóng, tạo tủa màu đen với thông tư sulfite có trong thiên nhiên và môi trường .

 Thử nghiệm khả năng sinh indol: một số vi sinh vật có khả năng oxy hóa

Xem thêm: Dụng cụ tập gym, dụng cụ thể hình giá rẻ 2023

tryptophan thành những loại sản phẩm chứa gốc indol. Việc phát hiện indol được triển khai bằng phản ứng của phân tử này với những thuốc thử chứa p – Dimethylaminobenzaldehyde ( p-DMABA ) tạo nên một phức chất dạng quinon có màu đỏ .

 Thử nghiệm KIA, TSI: môi trường KIA (Kligler Iron Agar) và môi trường

TSI (Triple Sugar Iron agar) được sử dụng để kết hợp thử nghiệm đồng thời
khả năng sử dụng các nguồn cacbon khác nhau (glucose, lactose) và khả
năng sinh H2S của chủng vi sinh vật. Nếu vi sinh vật chỉ lên men đường
glucose thì sau 18 – 24 giờ nuôi cấy môi trường thạch nghiêng phần trên sẽ
có màu đỏ, phần sâu sẽ có màu vàng. Nếu vi sinh vật lên men cả đường
glucose và lactose thì thị sau 18 – 24 giờ toàn bộ môi trường sẽ có pH acid,
môi trường có màu vàng. Nếu vi sinh vật không sử dụng được cả hai nguồn
cacbon trên thì chỉ có phần trên thạch chuyển sang màu đỏ. Trong các trường
hợp trên nếu sự lên men đường tạo ra các sản phẩm khí thì sẽ làm vỡ thạch.
 Thử nghiệm nitratase: Thử nghiệm này nhằm xác định khả năng tổng hợp hệ

enzyme nitratase xúc tác sự khử nitrate thành nitrit và nitơ phân tử của vi sinh vật .

 Thử nghiệm oxidase:thử nghiệm này nhằm xác định sự hiện diện của hệ

enzyme oxidase ở vi sinh vật .

 Thử nghiệm ONPG: Xác định sự có mặt của enzyme β-galactosedase có vai

trò xúc tác sự thủy phân lactose trong tế bào vi sinh vật dựa vào một cơ chất tổng hợp là o-nitrophenyl-D-galactopyranoside ( ONPD ). Sự thủy phân của cơ chất đường này bởi β-galactosidase sẽ phóng thích o-nitrophenol có màu vàng .

 Thử nghiệm MR (methyl red): Thử nghiệm MR nhằm phân biệt vi sinh vật

dựa trên sự độc lạ về năng lực tạo ra và duy trì những mẫu sản phẩm biến dưỡng có tính axit bền trong môi trường tự nhiên trong quy trình lên men glucose. Thử nghiệm MR nhờ vào rất lớn vào thời hạn nuôi cấy. Khi lê dài thời hạn nuôi cấy, những vi sinh vật có phản ứng MR ( + ) có đặc tính là tích góp axit trong môi trường tự nhiên ngày càng nhiều, pH trong môi trường tự nhiên ngày càng giảm. Các vi sinh vật có phản ứng MR ( – ) sẽ liên tục chuyển hóa những mẫu sản phẩm có tính axit thành những mẫu sản phẩm trung tính, pH sẽ chuyển về phía trung tính. Chỉ thị metyl red giúp phân biệt nồng độ H + hiện hữu trong môi trường tự nhiên sau khi vi sinh vật lên men .

 Thử nghiệm VP (Voges – Proskauer): thử nghiệm VP giúp phân biệt các loài

trong họ Enterobacteriaceae dựa trên sự oxi hóa acetoin .

 Thử nghiệm CAMP: Là phản ứng phối hợp giữa nhân tố protein và nhân tố

β-hemolysin tiết ra bởi chủng Staphyloccocus aureus gây ra hiện tượng kỳ lạ làm tan máu hồng cầu của cừu hoặc bò trên thiên nhiên và môi trường thạch máu. Nếu thử
nghiệm ( + ) thì sẽ Open đường tan huyết phân biệt rõ với vùng sẫm màu còn lại trong môi trường tự nhiên .

 Thử nghiệm tính di động: khả năng di động của vi sinh vật có thể theo dõi

được trên thiên nhiên và môi trường thạch mềm. ngoài những, triphenyltetrazolium chloride ( TTC ) hoàn toàn có thể được bổ trợ vào môi trường tự nhiên để giúp phát hiện thuận tiện vị trí hiện hữu của tế bào vi sinh vật trong môi trường tự nhiên do hợp chất này khi vào bên trong tế bào sẽ bị khử thành formazan có màu đỏ .
Ngày nay những thử nghiệm sinh hóa truyền thống cuội nguồn để định danh vi sinh vật đã hoàn toàn có thể được thực thi ỏ những thuốc thử ở dạng đĩa giấy, que giấy. Ngoài ra, còn có những bộ kit được cho phép thực thi hàng loạt những phản ứng sinh hóa theo một tiến trình lựa chọn để định danh vi sinh vật. Các bộ kit này sản xuất dưới dạng thương phẩm có ưu điểm ví dụ như mỗi bộ kit chỉ cho phép định danh được 1 số ít vi sinh vật, ngân sách thử nghiệm đắt tiền hơn. Ngoài ra, nhu yếu nghiên cứu và phân tích số lượng mẫu lớn của trong thực tiễn công tác làm việc kiểm nghiệm nhanh để rút ngắn thời hạn từ khi nhận mẫu đến khi có hiệu quả. Do vậy, nhiều thiết bị được sản xuất nhằm mục đích tự động hóa công tác làm việc kiểm nghiệm, đặc biệt quan trọng là không nhu yếu kiểm nghiệm viên luôn phải xuất hiện để giám sát việc làm, hoàn toàn có thể thực thi qua đêm .

VI.6. Các phương pháp truyền thống phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật:
VI.6.1. Tổng số vi khuẩn hiếu khí:

Chỉ số này còn có tên gọi khác là : số vi sinh vật hiếu khí, tổng số đếm trên đĩa, tổng số vi sinh vật sống, số đếm đĩa chuẩn. Chỉ tiêu này được dùng để nhìn nhận mức độ nhiễm tạp của nguyên vật liệu và mẫu sản phẩm. Từ đó nhìn nhận thực trạng vệ sinh và những điều kiện kèm theo dữ gìn và bảo vệ loại sản phẩm và Dự kiến năng lực hư hỏng của loại sản phẩm .
Vi khuẩn hiếu khí là những vi trùng tăng trưởng và hình thành khuẩn lạc trong điều kiện kèm theo có sự hiện hữu của oxy phân tử ( O2 ). Tổng số vi trùng hiếu khí hiện hữu trong mẫu thông tư mức độ vệ sinh của thực phẩm. Chỉ số này được xác lập bằng phương pháp đếm khuẩn lạc mọc trên thiên nhiên và môi trường thạch dinh dưỡng từ một lượng mẫu xác lập trên cơ sở xem một khuẩn lạc là sinh khối tăng trưởng từ 1 tế bào hiện hữu trong mẫu và được màn biểu diễn dưới dạng số đơn vị chức năng hình thành khuẩn

lạc (colony forming unit, CFU) trong một đơn vị khối lượng thực phẩm.

VI.6.2. Coliforms và Escherichia coli

Coliforms là những trực khuẩn Gram ( – ) không sinh bào tử hiếu khí hoặc kỵ khí tùy ý, có năng lực lên men lactose sinh axit và sinh hơi ở 37 oC trong 24 – 48 giờ, hiện hữu thoáng rộng trong tự nhiên, trong ruột người, động vật hoang dã. Chúng gồm có :

Escherichia coli, Enterobacter spp, Citrobacter spp, Klebsiella spp. Số lượng hiện

diện của chúng trong thực phẩm được dùng để thông tư năng lực hiện hữu của những vi sinh vật gây bệnh khác. Tính chất sinh hóa đặc trưng của nhóm này được biểu lộ qua những thử nghiệm Indol ( I ), Methyl Red ( MR ), Voges Proskauer ( VP ) và Citrate ( iC ) thường được gọi chung là IMViC .

–Coliforms chịu nhiệt là những Coliforms có khả năng lên men lactose sinh hơi

trong khoảng 24 giờ khi được ủ ở 44oC trong môi trường canh EC.

–Coliforms phân (Feacal Coliforms hay E.coli giả định) là Coliforms chịu nhiệt

Xem thêm: Thiết Bị Dụng Cụ Cầm Tay Giá Rẻ Tại TP.HCM – Dụng Cụ Vàng

Dùng để thông tư mức độ vệ sinh trong quy trình chế biến, dữ gìn và bảo vệ, luân chuyển thực phẩm cũng như thông tư sự ô nhiễm phân .
Để định lượng coliforms hoàn toàn có thể nuôi cấy trên môi trường tự nhiên lỏng ( phương pháp MPN ) hoặc trên thiên nhiên và môi trường thạch rắn tinh lọc bằng phương pháp đếm khuẩn lạc .

VI.6.3. Staphylococcus aureus:

Source: https://suanha.org
Category : Dụng Cụ